1.目的：该规程规定了LC3000系列液相色谱仪的操作方法、注意事项等。使操作人员可以按照此规程进行规范操作、更好的使用和维护该仪器。

2.范围：本规程适用于LC3000系列液相色谱仪的操作人员和维护人员，供相关实验人员参照执行。

3.引用标准：《液相色谱LC3000系列标准操作规程》

4.操作方法

4.1 准备

4.1.1 流动相:液相用水必须是超纯水；所用液体试剂为HPLC级；固体制剂最好为优级纯；配置好的流动相需经0.45μm微孔滤膜过滤，并超声脱气15min以上

4.1.2 清洗液：系统配置自动进样器，测试前需要补充清洗瓶中的清洗液，清洗液也需要过滤并超声脱气；

4.1.3制备测试用对照品和供试品，注入系统前需用0.45μm的滤膜过滤；

4.1.4根据测试方法查看流动相是否与高压泵输液管对应，二元高压梯度注意识别W和B泵，四元低压梯度系统注意识别A、B、 C、D四个通道；

4.1.5 选择合适的色谱柱，并按照色谱柱上标注的方向正确安装；

4.1.6检查仪器各个模块的电源及管路是否安装正确

4.2 开机

4.2.1分别开启仪器各个部分的电源开关，并打开计算机。仪器自检结束后，运行Cactus色谱工作站。打开“采集”界面中的仪 器控制，查看仪器各个模块是否联机正常

4.3更换流动相、排气

4.3.1取小烧杯倒入适量的流动相，将对应管路的滤头浸入烧杯中的流动相中，轻轻搅拌洗去滤头原来残留的溶剂

4.3.2将清洗好的滤头放入流动相瓶中，逆时针拧开高压泵上的放空阀，点击仪器控制面板中的排空按钮，排空3-5分钟。二元 高压梯度系统点击‘‘启动purge”按钮，四元低压梯度系统点击“purge”按钮后需要选择通道，然后点击“开始”按钮 才能启动排空操作。

4.3.3完成排空操作后，点击软件上二元高压梯度系统中“停止purge”按钮或四元低压梯度系统中的“停止”按钮，然后顺时 针将仪器面板上的放空阀旋钮拧紧。

4.4创建仪器方法、平衡系统

4.4.1点击cactus工作站中“单样品分析”选项卡，在仪器方法的下拉菜单中选择“创建新方法”；根据测试要求编辑各个参 数，然后保存该方法；

4.4.2系统平衡：同样在“单样品分析”选项卡中选中刚刚建立的仪器方法，该方法即被加载到“单样品分析”界面中，设置平 衡时间（时间由用户自行设定）。点击“启动平衡”，系统将按照仪器方法中的第一条程序运行系统。该操作用户也可以 在仪器的各个模块中手动设置。

4.5进样分析

4.5.1手动进样

 a. 在“单样品分析”中加载仪器方法

 b. 在“设置谱图信息”中设置谱图保存路径和谱图备注信息，勾选“自动保存”

 c. 微量注射器先用待测样清洗，然后吸取适量的样品。

 d. 六通阀保持在“INJECT”位置时，将进样针插入进样口，然后将六通阀扳至“LOAD”位置，将进样针中的样品全部注入到定量环中。

 e.将六通阀快速且匀速的扳至“INJECT”位置，即可完成一次进样。

4.5.2 自动进样

 a.在样品瓶中加入过滤后的样品，体积尽量不超过瓶身上的最高刻度线，将样品瓶放入进样器托盘中，注意区分左右盘；

 b.在“样品组分析”中新建分析序列，并设置样品名称，选择仪器方法，设置进样位置、清洗体积、进样方式、润洗体积和进样量；

 c.在“设置谱图信息”中设置谱图保存路径和谱图备注信息，勾选“自动保存”；

 d.点击“样品组分析”中的运行按钮，运行序列。

4.6 数据处理

4.6.1 在“数据处理”界面打开所需处理的谱图文件；

4.6.2 点击“方法编辑”，打开谱图文件，设置积分条件、定量参数、组份名称等，保存处理方法；

4.6.3 将所要处理谱图文件和模板分别加载到批量处理的列表中，点击“运行”按钮即可完成对谱图的批量处理；

4.7 报告

4.7.1在“导航”界面点击“打印”,进入报告编辑界面，选择所需出具报告的谱图，编辑需要体现的条件、参数等，或者选择已经编辑好的报告格式进行处理，点击左上角“打印”即可

4.8 清洗系统

4.8.1 系统及色谱柱清洗

 a.对于反相系统，如果没有用到缓冲盐，用甲醇或乙腈冲洗10个柱体积以上直至没有色谱峰流出;如果系统用了缓冲盐,先要用20%甲醇水溶液过渡系统,直至盐被洗出之后再用纯有机溶剂冲洗系统即可；

 b.对于正相系统,根据色谱方法选用合适的溶剂清洗即可,注意不要将水注入正相系统中；

4.8.2 清洗进样器

 a.如果是手动进样阀，需要用到进样阀自带的清洗组件，在进样阀的“INJECT”位置用注射器注入甲醇水溶液，清洗进样针导管内残留的样品；

 b.自动进样器可以点击“开始清洗”按钮，即可完成对自动进样器的清洗；

4.9 关机

4.9.1 清洗完成后，点击软件中的停泵按钮，停止输液，并退出Cactus工作站。然后关闭检测器、高压泵、柱温箱、进样器（自动）、电脑电源；

5.注意事项

5.1对于首次安装或者管道内有大量气泡的情况，需要使用注射器辅助排空。拧开放空阀后，再拧开放空管上的鲁尔接头，插入注射器并抽尽系统中的气泡，拧上鲁尔接头后再按照操作排空。

5.2如果是满环进样，样品要吸取定量环3-5倍的体积；如果是部分进样，进样体积最好不要超过定量环的0.5倍。

5.3 每次分析结束后需清洗系统，保证色谱柱充满甲醇；

5.4 液相系统需要定期清洗，尤其长时间不用情况下；

5.5 紫外检测器应在进样前30min打开，样品分析完毕立即关闭；

5.6 检测方法用到梯度洗脱时，要先单次运行1-2次，待基线平稳后方可进样；

5.7 蠕动泵内溶液为10%甲醇，建议一周更换一次；

5.8 手动进样阀，每次分析完样品后，需用纯甲醇清洗进样阀；

5.9 流动相中有缓冲盐时，分析完样品后，需用20%甲醇冲洗约1h，再用甲醇水梯度洗脱，最后再用纯甲醇冲洗。